反相色譜柱是一種在液相色譜分析中常用的色譜柱,其核心特點在于固定相為非極性材料,而流動相為極性溶劑。具有高靈敏度和選擇性,能夠檢測出低濃度的成分,甚至達到痕量級別,同時實現不同成分的有效分離,尤其適用于復雜樣品的分析。其穩定性好,色譜峰形狀和出峰時間穩定,且應用范圍廣泛,適用于多種不同類型和濃度的樣品分析,如蛋白質、核酸、藥物、食品等。
1、分離極性化合物
反相色譜柱(如C18柱)的固定相為非極性(如十八烷基硅烷鍵合相),流動相為極性溶劑(如水、甲醇、乙腈等)。
疏水性強的組分與固定相吸附更緊密,保留時間較長;極性強的組分優先被極性流動相洗脫,保留時間較短。
適用對象:肽類、核酸、有機酸、藥物活性成分等極性或中等極性物質。
2、復雜樣品的組分分析
通過調整流動相的極性(如改變甲醇/水比例)、pH值或添加劑(如三氟已酸TFA),優化不同組分的分離度。
示例:蛋白質消化后的多肽混合物、中藥提取物中的活性成分分析。
3、制備級純化
在制藥、天然產物提取等領域,利用反相色譜柱進行大規模制備,收集高純度目標組分(如95%以上)。
特點:可處理復雜基質,減少雜質干擾。
4、去除雜質或污染物
在生物制藥中,用于去除酶解產物中的鹽分、未反應底物或變性蛋白。
在環境檢測中,分離水體中的極性污染物(如農藥、抗生素)。